纯氟油（yóu）Fluo-Oil 135(氟（fú）油3M Novec HFE7500电子（zǐ）氟化液的替代品)

Fluo-Oil 135（简称FO135） 是一种（zhǒng）纯氟（fú）化油，可用于替换氟油3M Novec HFE7500电子氟化液。 Fluo-Oil 135氟油的化学和物（wù）理化学性（xìng）质与3M Novec HFE7500 相（xiàng）似，如下表（biǎo）所（suǒ）示:

优势

生（shēng）物（wù）相（xiàng）容性、可重复（fù）性和稳定性（xìng）。

如何使（shǐ）用？

氟油Fluo-Oil 135用于稀释FluoSurf Neat表面活性剂或已经用Fluo-Oil 135油稀释的表面活性剂。

（由于FluoSurf Neat表面活（huó）性剂是一种PFPE-PEG结构的复杂高效纯（chún）表面活性剂，因为类似于PFPE-PEG结构的纯表面活性剂如FluoSurf Neat，Surf-Drop，PFPE-PEG-PFPE两嵌段（duàn）或三嵌段表面活性剂，Surf 含氟（fú）表面活性剂等，基本（běn）上都可以（yǐ）使用纯氟油Fluo-Oil 135进行稀释（shì）。稀释（shì）的浓度从0.2%到12%之（zhī）间。）

保存

室（shì）温下（xià）避光（guāng）保存

安全注意事项

● 避（bì）免吸入、摄入和接触（chù）皮肤和眼睛

● 穿戴耐化学腐蚀的个人防护装备

● 戴上合适的手套

● 穿合（hé）适的防（fáng）护服

● 戴侧护罩的安（ān）全眼镜

与3M HFE7500油产生液（yè）滴性能（néng）的测试比较（jiào）

分别用（yòng）3M HFE7500和（hé）Fluo-Oil 135氟化油稀（xī）释FluoSurf neat表面活性剂，得到（dào）4w/w%的质量浓度。

水滴产生或（huò）油包水液滴产生的两相流速（sù）：

油相流（liú）速为（wéi）300μL/hr，水相流（liú）速（sù）为100μL/hr。

水相为PBS溶液或100μM荧（yíng）光素的PBS溶液（yè）（用于测试液滴（dī）的（de）泄露（lù））

倒（dǎo）置（zhì）显微镜（jìng）观察和Image J软件分（fèn）析。

一、液滴尺（chǐ）寸及其（qí）分布

在（zài）Fluo-Oil 135和HFE7500油中，产生（shēng）相似尺寸的水（shuǐ）滴。在既定（dìng）流速参数下，液滴的平均直径为110μm。液滴尺（chǐ）寸的CV分别为2.3%（Fluo-Oil 135油）和2.9%（HFE7500油）。

二、液滴（dī）稳定性

大多（duō）数研究团队（duì）使（shǐ）用（yòng）液滴微流（liú）体进（jìn）行细（xì）胞（bāo）封装或（huò） PCR 应用。 因此，需要通过 PCR 的（de）加热循（xún）环以及（jí）在 37°C 下（xià）长（zhǎng）期孵育来产生（shēng）稳定的液滴。 表面活性剂的（de）选择至关重要，但选择（zé）油同样重要（yào），以确保可重复的（de）实验以及单分散液（yè）滴群（qún）的（de）生成（chéng）和保存。

分别从三个方面测试液滴的稳（wěn）定性（xìng）：一是把液滴重新注入（rù）到玻（bō）璃观察腔室内；二是经典（diǎn）的（de）PCR热（rè）循环过程，循环（huán）过程30次，每次热循环为98°C运行10s, 50°C运行（háng）5s, 72°C运行10s；三（sān）是置于37℃的培养箱内放置3天（tiān）。对1万（wàn）个液滴进行分析（xī）。

无论是在 Novec™ HFE 7500 还是 Fluo-Oil™ 135 中形成 FluoSurf™ 稳定的液滴，在 PCR 加热（rè）循环后或在 37°C 孵育 3 天后，液滴平均（jun1）尺寸（cùn）在生成时保持不变 [约 110μm (0.7nL)] 。此外（wài），液滴种群仍（réng）然是单分散的。 根据统计分析，计（jì）算出在加热循环（huán）后，只（zhī）有 5% 的整体（tǐ）液滴的大（dà）小（xiǎo）与平均初始液（yè）滴（dī）直径的（de）差异超过（guò） 10%。

将氟化（huà）油从 Novec™ HFE 7500 切换到 Fluo-Oil™ 135 对（duì）液滴稳定性没（méi）有影响。

三（sān）、液（yè）滴内的分子滞留

基于液滴的化学或生化分析（xī）依赖于（yú）试剂在单个液滴中保持隔离。 泄（xiè）漏到连续（xù）相和液滴之间（jiān）的交换，即使很低，也会影响结果的完整性，因（yīn）此，分子保留是选择（zé）氟化油（yóu）时要考虑的重要参数。 众所周（zhōu）知（zhī），氟化油（yóu）会限制液滴之间的（de）分子交换，因此应（yīng）验证切换油的影响。

同时（shí）生成（chéng）两（liǎng）种油（yóu）包水乳液[“空”（负载（zǎi） PBS）和“满”（负载荧（yíng）光素（sù））液滴]，一（yī）次使用（yòng） Novec™ HFE7500，然后使用 Fluo-Oil™ 135 作为（wéi）连续（xù）相。 两种混合物（wù），每一种都包含两个种群，在（zài） 37°C 下孵（fū）育，并在（zài）不同的时间点拍摄照片（piàn）。 使（shǐ）用 ImageJ 软件对液滴（dī）内荧光强度的演变进行了统（tǒng）计定量分析（xī）。

上（shàng）图（tú）显示了两个群（qún）体之间平均荧光强度差异的演变（染料加载和空液滴）以（yǐ）及在初始时间点（diǎn）和 48 小（xiǎo）时后相关的（de）荧光（guāng）和明（míng）场（chǎng）图片。

在（zài） 24 小时的过（guò）程中，两种（zhǒng）氟化油产（chǎn）生的液（yè）滴中（zhōng）荧（yíng）光素的泄漏率相似（约 15% 泄（xiè）漏），并且在（zài） Fluo-Oil™ 135 中产生液滴的情（qíng）况下（xià）保（bǎo）持恒定（dìng） 3 天。相反，在 24 小时后， Novec™ HFE7500 中液滴的泄漏继续减少并达到 30% 左右。 这种较（jiào）长孵育时间的较差保（bǎo）留性能可归因（yīn）于后一种（zhǒng）油的粘度略低（dī），加速了液滴（dī）之间更快的（de）分子交换。

结论

对于基于液滴的微流体应（yīng）用，从（cóng）一种（zhǒng）氟化油类型切（qiē）换（huàn）到另（lìng）一种类（lèi）型（xíng）可能会对微（wēi）流体（tǐ）实验（yàn）的过程产生重大影（yǐng）响，尤其是对液滴的有效生（shēng）成产生重大影响。 在氟油（yóu）3M Novec™ HFE7500电子氟化液 和（hé） 氟（fú）油（yóu）Fluo-Oil™ 135 的情况下，已证实更换（huàn）这两（liǎng）种氟化油对实验条（tiáo）件和结果没有影响。 当使用 Fluo-Oil™ 135 作为连续相时，甚至可以观察到荧光素在液滴内的更好保留。

氟化油Fluo-Oil™ 135 是用（yòng）于液滴微流（liú）体应用（yòng）的3M Novec™ HFE7500 氟油 的有效替代品。